無菌檢查、微生物限度檢查的所有操作均需在嚴(yán)格控制微生物污染的環(huán)境下進(jìn)行，操作環(huán)境的無菌保證程度將直接影響無菌檢查結(jié)果，為了保證無菌檢查用潔凈室(區(qū))環(huán)境的穩(wěn)定性，確保檢查結(jié)果的可靠性，對潔凈室(區(qū))的環(huán)境質(zhì)量采取合理的控制措施和評價方法是必要的。無菌檢查、微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級和局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。

　　無菌室應(yīng)采光良好、避免潮濕、遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10平方米，不小于5平方米;高度不超過2.4m。由1~2 個緩沖間、操作間組成(操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對)，操作間與緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物;無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道。

　　無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺，室內(nèi)溫度控制18~26℃，相對濕度45%~65%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300lx。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈(2~2.5W/平方米)，應(yīng)定期檢查輻射強度，要求在操作面上達(dá)40/μW/平方厘米，不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時更換。

　　無菌室應(yīng)每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液擦拭操作臺及可能污染的死角，開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1小時。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺面，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌半小時。

　　無菌室的潔凈度檢查無菌室在消毒處理后，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達(dá)到規(guī)定的潔凈度，常有沉降菌和浮游菌測定方法。

　　沉降菌檢測方法及標(biāo)準(zhǔn);以無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺面左、中、右各放1個;打開碟蓋扣置，平板在空氣中暴露30分鐘后將碟蓋蓋好，置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48小時，取出檢查，3個平板上生長的菌落數(shù)平均不超過1個。

　　浮游菌檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計和定時器，嚴(yán)格按儀器說明書的要求操作并定期校驗，采樣器和培養(yǎng)皿進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認(rèn)可的其它培養(yǎng)基。使用時，先開動真空泵抽氣，時間不少于5分鐘，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48小時，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得過5個/平方米。

　　每批培養(yǎng)基應(yīng)選定3只培養(yǎng)皿做對照培養(yǎng)。

　　無菌操作臺面或超凈工作臺還應(yīng)定期請有關(guān)部門檢測其懸浮粒子，應(yīng)達(dá)到100級(一般用塵埃粒子計數(shù)儀)檢測塵埃粒徑≥0.5μm的粒數(shù)不得超過3.5個/升，≥5μm的粒數(shù)為0，空氣流速應(yīng)≥0.35m/s，可根據(jù)無菌狀況必要時置換過濾器。

　　陽性對照和限度室的區(qū)別：

　　功能上不一樣，硬件上應(yīng)該是一樣的。

　　限度室主要是做限度檢查的即規(guī)定量樣品中含菌量。

　　陽性對照室是做陽性對照的，和一些加菌試驗或檢測。

　　限度室是提供一個相對潔凈的環(huán)境供檢測用的。陽性室是提供一個固定的空間操作有菌的檢測的限度室的樣品可能會含菌，陽性室的樣品基本上都是要加菌的(如殺菌劑的殺菌效果，就要在殺菌劑中添加一定量的菌液)。

　　限量室和陽性室不能混用，否則在陽性室做限度檢查會出現(xiàn)假陽性;在限度室做有菌的檢測會污染限度室的環(huán)境。

　　另外限度室不是做無菌檢測的。無菌檢測應(yīng)該在單獨的無菌室操作。

　　常規(guī)來說，主要設(shè)備：

　　無菌室，超凈工作臺(或者隔離器)，集菌儀;

　　微生物限度室，超凈工作臺(或者隔離器)，一般微生物限度檢測儀，振搖儀(也可以手動振搖不需要配置，根據(jù)企業(yè)情況)，混合器;

　　陽性室：生物安全柜，混合器。

　　除以上設(shè)備外，根據(jù)自己企業(yè)產(chǎn)品選配相應(yīng)輔助設(shè)備。